
El tanino de Castanea sativa reduce las lesiones intestinales por coccidiosis en pollos de engorde Eveline Berwanger1, Fabrizio Oristanio*2, Neyre N. Shiroma1, André N. Mayer1, Clarisse Techer2 1SALUS COM. DE PROD. DE SAÚDE E NUTRIÇÃO ANIMAL S.A., Técnico, Santo Antônio de Posse, São Paulo, Brasil; 2miXscience, Bruz, Francia El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto del tanino hidrolizable de Castanea sativa (Kingbrown®) como coccidiostático en la salud intestinal de los pollos de engorde. El ensayo se realizó en una instalación experimental en el estado de São Paulo, Brasil. Un total de 192 pollitos Cobb machos se asignaron a cuatro tratamientos: T1 dieta control negativa, T2 dieta control positiva, T3 dieta con salinomicina + ácido 3-nitro-4-hidroxi-fenilarsónico, T4 dieta con tanino Kingbrown®. El Kingbrown® se añadió a razón de 1 kg por tonelada de alimento. A los 14 días de edad, todos los tratamientos, excepto el control negativo, fueron desafiados con Eimeria maxima (1 ml con 12,000 ooquistes esporulados por ave). A los 20 días de edad, se tomaron muestras de fracciones del yeyuno y se puntuaron las lesiones de cero a cuatro. Las medias de las puntuaciones de las lesiones se compararon mediante la prueba de Kruskal-Wallis y las frecuencias de las puntuaciones de las lesiones se compararon mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Menos del 7% de las aves no desafiadas con E. maxima presentaron lesiones intestinales, mientras que todas las aves desafiadas mostraron lesiones intestinales. Las aves alimentadas con dieta de salinomicina + ácido 3-nitro-4-hidroxi-fenilarsónico redujeron significativamente la puntuación de las lesiones en comparación con el grupo de control positivo (2.1 a 1.67; p = 0.0075). Las aves alimentadas con tanino Kingbrown® también redujeron significativamente la puntuación de las lesiones (2.1 a 1.73; p = 0.0075) en comparación con el grupo de control positivo. Ambos aditivos alimentarios tuvieron el mismo efecto sobre la puntuación de las lesiones (1.67 a 1.73; p > 0.05). En conclusión, los datos de este estudio indican que la suplementación con tanino Kingbrown® en los pollos de engorde reduce las lesiones intestinales causadas por Eimeria maxima. Palabras clave: Eimeria maxima, tanino, coccidiostático, lesiones intestinales, pollitos
Monitoreo ambiental de la variante IBV-G1-23 en parvadas avícolas uruguayas utilizando la herramienta de muestreo de aire CAPTUS Martin Masner*1, Luis-Miguel Gomez-Osorio1, Andres Pio1, Pia Fernandez1, Facundo Rocha Calvette1, Ignacio González23, Franco Bazzi4, William Serna1, Laura Maccio1 1metaBIX Biotech, Montevideo, Uruguay; 2Avícola El Campo, Tala, Uruguay; 3UDELAR, Facultad de Veterinaria, Montevideo, Uruguay; 43 Arroyos, Canelones, Uruguay El monitoreo de ambientes avícolas para patógenos presenta varios desafíos, incluidos garantizar una muestra representativa, superar las limitaciones de los métodos no cuantitativos y abordar la aparición de nuevas variantes de patógenos que afectan la producción avícola. Este estudio investiga el uso de CAPTUS, un dispositivo de muestreo de aire, para detectar y cuantificar la variante IBV-G1-23 en parvadas avícolas uruguayas en múltiples instalaciones de producción. El muestreo se realizó semanalmente o ad libitum en gallinas reproductoras y ponedoras en áreas rurales de Uruguay. Utilizando el muestreador de aire CAPTUS, se recolectaron muestras de aire de 30 minutos que luego fueron analizadas en un laboratorio de biología molecular. Después de la extracción de ácidos nucleicos, se realizaron ensayos qPCR dirigidos al IBV genérico y a la variante específica IBV-G1-23 en muestras individuales o combinadas. Otros patógenos, incluidos otras variantes de IBV, Metapneumovirus, Reovirus, Gumboro, Salmonella y Mycoplasma G/S, también fueron analizados mediante qPCR en las muestras recolectadas. La mayoría también resultaron positivas, excepto Metapneumovirus. La variante IBV-G1-23 se detectó en las parvadas con signos respiratorios, particularmente en aquellas sin vacunación específica para serotipo. Se observó una marcada disminución en la producción de huevos (21-34%) durante las fases de infección aguda. La detección ambiental del virus persistió durante al menos diez semanas, con cargas virales máximas alcanzando cientos a miles de copias por metro cúbico. Los niveles serológicos elevados de IBV confirmaron los desafíos en el campo por cepas no vacunales. En conclusión, el muestreo de aire CAPTUS proporciona un método confiable para la vigilancia de patógenos, ofreciendo información crítica sobre la presión de infección ambiental y la dinámica de patógenos. La adaptabilidad del método permite la detección de múltiples patógenos, lo que facilita las estrategias de respuesta rápida contra la variante IBV-G1-23, apoyando la salud y productividad avícola. Palabras clave: Muestreo de aire, Bronquitis, IBV, CAPTUS, Presión ambiental de infección
Secuenciación directa de ARN con la plataforma Minion permite la secuenciación de lecturas casi completas del ARN viral de Orthoavulavirus javaense Megan Mears*2, Quentin Read3, Abhijeet A. Bakre1 1USNPRC, Unidad de Investigación sobre Enfermedades Virales Exóticas y Emergentes en Aves, Athens, Georgia, Estados Unidos; 2USNPRC, Unidad de Investigación sobre Enfermedades Virales Exóticas y Emergentes en Aves, Athens, Georgia, Estados Unidos; 3USDA-ARS Área Sureste, USDA, Raleigh, Carolina del Norte, Estados Unidos La enfermedad de Newcastle (ND) es causada por cepas virulentas de Orthoavulavirus javaense (OAVJ). El OAVJ puede infectar a muchas especies de aves, pero los brotes con cepas virulentas pueden causar pérdidas económicas significativas para la industria avícola. La identificación rápida de OAVJ virulentos en muestras de campo es crucial para el control de brotes de ND. En este estudio, planteamos la hipótesis de que la secuenciación directa de ARN utilizando un dispositivo MinION de Oxford Nanopore Technologies (ONT) y un adaptador personalizado permitiría secuenciar el genoma completo (~15.2kb) de ARN viral de OAVJ. Se extrajo ARN de muestras biológicas triplicadas de viriones purificados con sacarosa de la cepa LaSota de OAVJ, luego se secuenció utilizando las dos diferentes químicas y flujos disponibles de ONT. Las diferencias estadísticas entre los dos grupos se evaluaron utilizando una prueba t no emparejada con corrección de Welch. Los datos demuestran que un adaptador específico para OAVJ emparejado con los kits DRS de ONT permite la captura y secuenciación de ARN viral de OAVJ. Además, la nueva química ONT SQK-RNA004 y los flujos, emparejados con el flujo de trabajo de llamada base súper precisa, mejoran la calidad y la longitud de las lecturas en comparación con la química anterior SQK-RNA002. Este es el primer informe de un método para secuenciar el genoma completo de ARN viral de un miembro de la familia Paramyxoviridae. Aunque se necesitan más mejoras en DRS antes de la adaptación generalizada de este método para secuenciación rápida en campo, la DRS de OAVJ tiene el potencial de permitir más estudios sobre el epitranscriptoma viral y su papel en la infección y patogénesis. Palabras clave: Virus de la enfermedad de Newcastle, Secuenciación directa de ARN, MinION, ARN viral, Paramyxovirus
Desarrollo de un ensayo para detectar cito lisina y una isla de patogenicidad presunta de Enterococcus faecalis asociada con la mortalidad de embriones de pollo Jessica Foote*1, Enid T. McKinley1, Claire Podvin1, Zachary Zawada1, Jen Key1, Jodi Delago1, Alexandra H. Smith1 1 Church & Dwight, Arm & Hammer Animal Nutrition, Waukesha, Wisconsin, Estados Unidos La tasa de eclosión de pollos broiler en los Estados Unidos ha disminuido de manera constante desde 2012. Un posible agente causal de esta tendencia es Enterococcus faecalis, cuya infección se ha hipotetizado como causa de la mortalidad temprana de embriones en pollos. El objetivo de este estudio fue determinar la capacidad de E. faecalis para causar mortalidad en embriones de pollo, identificar los genes presentes en las cepas que causaron un aumento significativo en la mortalidad, y desarrollar un ensayo de alto rendimiento para detectar estos genes en aislamientos de campo. Para lograr estos objetivos, se realizó un ensayo de letalidad en embriones. Se inyectaron embriones fertilizados de pollo con diferentes cepas de E. faecalis previamente aisladas de complejos avícolas y cuyos genomas fueron secuenciados. Se registró la tasa de mortalidad de cada grupo de tratamiento diariamente. Después de siete días, las tasas de mortalidad acumulada de cada cepa y grupo de control se compararon utilizando la prueba exacta de Fisher. Cada cepa mostró una tasa de mortalidad significativamente mayor que el grupo de control (p<0.01), demostrando que E. faecalis puede causar mortalidad en embriones. Las cepas que contenían la toxina de Enterococcus, cito lisina, tuvieron una mortalidad significativamente mayor que las cepas sin ella (71% vs 21%, p<0.0001). Se encontró una isla de patogenicidad (PAI) de 20 kilobases que contenía varios genes de pared celular, cápsula y O-antígeno solo en las cepas que causaron más del 60% de mortalidad. Las cepas que contenían esta PAI tuvieron una mortalidad significativamente mayor que las cepas sin ella (78% vs 31%, p<0.0001). Se diseñaron cebadores para tres genes en la PAI y un gen en el operón de cito lisina. Estos cebadores y un conjunto de cebadores específicos para la especie E. faecalis se utilizaron para desarrollar un ensayo PCR multiplex. Este ensayo se utilizó con éxito para examinar aislamientos de Enterococcus de complejos avícolas que experimentaron problemas de salud. La cito lisina se detectó en el 2% de los aislamientos de E. faecalis y la PAI se detectó en el 12%. En conclusión, se desarrolló un ensayo mPCR para detectar marcadores genéticos en E. faecalis que están asociados con un aumento en la mortalidad de embriones de pollo. Este ensayo proporciona una herramienta valiosa para monitorear E. faecalis patogénico en incubadoras para determinar si las cepas altamente virulentas están asociadas con los problemas actuales de eclosión en el campo. Palabras clave: Enterococcus, eclosión, mortalidad embrionaria, patógeno, genética
La eficacia de una vacuna inactivada contra el virus de la influenza aviar altamente patógeno H5 clade 2.3.4.4b en pavos Jiho Lee*1, Scott Lee1, Erica Spackman1, Chang-Won Lee1 1USDA, SERPL, Athens, Georgia, Estados Unidos El brote sin precedentes del virus de la influenza aviar H5N1 altamente patógeno (HPAIV) de la cepa 2.3.4.4b en los Estados Unidos ha causado un daño tremendo a la industria avícola. Debido a que los pavos tienen el mayor número de parvadas afectadas entre las aves comerciales, evaluar la eficacia de la vacuna y caracterizar la respuesta de anticuerpos en pavos es crucial. Se evaluó la eficacia de la vacuna inactivada H5N9 generada por genética reversa (SEP-22-N9) en pavos contra la cepa actual H5 del clado 2.3.4.4b de América del Norte, A/pavo/Indiana/22-003707-003/2022 H5N1. Los grupos de vacunación se dividieron en 3 grupos, que fueron vacunados en diferentes puntos de tiempo (3, 7 o 9 semanas). Todos los grupos vacunados mostraron una tasa de supervivencia del 100% y una disminución significativa de la eliminación viral después del desafío en comparación con el grupo vacunado con placebo. Se aplicó el ensayo de inhibición de neuraminidasa-lectina enlazada a enzimas (ELLA-NI) para evaluar la capacidad de detectar aves que han sido infectadas después de la vacunación (DIVA-VI). En general, la vacuna SEP-22-N9 proporcionó una rápida inmunidad para proteger a los pavos de la mortalidad, redujo la eliminación viral y fue capaz de aplicar el ensayo ELLA-NI para DIVA-VI, demostrando que la vacuna podría usarse contra los HPAIV H5 actualmente circulantes del clado 2.3.4.4b. Palabras clave: Influenza aviar altamente patógena, Pavo, Vacuna inactivada, Diferenciación de infectados de vacunados (DIVA)
Efectos inmunomoduladores de aceites esenciales sobre las respuestas inflamatorias agudas in vivo iniciadas por la inyección intradérmica de lipopolisacárido de Salmonella en pollos broiler bajo condiciones de estrés por calor Santiago Uribe-Diaz*1, Jossie M. Santamaria1, Chrysta N. Beck1, Andressa S. Stein1, Raul Marcon1, Alvaro Uribe-Serrano2, Jaime A. Angel-Isaza2, Guillermo Tellez-Isaias1, Billy Hargis1, Gisela F. Erf1 1Universidad de Arkansas, Ciencia Avícola, Fayetteville, Arkansas, Estados Unidos; 2Promitec Santander SAS, Unidad de Innovación y Desarrollo Biotecnológico, Bucaramanga, Colombia El calentamiento global es un desafío creciente para la industria avícola, ya que el estrés por calor reduce la productividad y debilita la función inmune. La suplementación con aceites esenciales (EO) ha mostrado actividades inmunomoduladoras en pollos. El objetivo del estudio fue determinar el efecto de la suplementación dietética con tres EO sobre las respuestas inflamatorias agudas a la inyección intradérmica (i.d.) de lipopolisacárido (LPS) en pollos bajo estrés por calor (HS). Se asignaron aleatoriamente pollos broiler COBB 500 de un día de edad a uno de los cinco grupos de tratamiento (termoneutral (TN), HS, HS-EO1, HS-EO2 o HS-EO3) criados en cámaras ambientales. El estrés cíclico por calor se aplicó desde el día 4 en adelante. A los 32 días de edad, 12 plumas de crecimiento (GF) de 7 pollos/grupo fueron inyectadas intradérmicamente con 1 µg de LPS. Se recogieron plumas GF y sangre heparinizada antes (0h) y a las 6 y 24h posteriores a la inyección (p.i.) para determinar los perfiles de leucocitos. Las suspensiones de células de plumas GF y sangre total fueron teñidas con inmunofluorescencia para identificar monocitos/macrófagos, heterófilos, células B y T por citometría de flujo. Los datos se analizaron mediante un ANOVA de medidas repetidas bidireccionales para determinar los efectos del tratamiento, el tiempo y sus interacciones. Se utilizaron comparaciones múltiples de medias de Tukey’s HSD cuando fue necesario; la significancia se estableció en P<0.1. Los niveles de heterófilos en plumas GF y sangre se elevaron a las 6h p.i., luego volvieron a los niveles previos a la inyección a las 24h para todos los tratamientos. No hubo efecto del tratamiento sobre los niveles de macrófagos, ni células T y B en plumas GF inyectadas con LPS. En sangre, se observaron pocos efectos del tratamiento después de la inyección de LPS; es decir, las concentraciones de leucocitos (WBC) fueron más bajas (P<0.1) en los pollos HS en comparación con los pollos TN a las 24h, y los heterófilos fueron más bajos (P<0.1) en HS-EO1 en comparación con HS-EO2 a las 6h. Para todos los tratamientos, la inyección intradérmica de LPS disminuyó las concentraciones de células T y B en sangre a las 6h p.i. Curiosamente, antes de las inyecciones de LPS, la concentración de leucocitos circulantes y células T era más alta en TN que en los grupos HS, un efecto de HS que se restauró parcialmente con la suplementación con EO. En resumen, la suplementación con aceites esenciales puede ayudar a mitigar algunos de los efectos negativos del estrés por calor en el desarrollo y la función del sistema inmunológico de los pollos, particularmente en el mantenimiento de las concentraciones de leucocitos y la capacidad de responder a estímulos inflamatorios bacterianos. Palabras clave: LPS, Respuesta inmune, Aceites esenciales, Estrés por calor, Pollo
Eficacia de protección de la formulación de vacuna de ADN del virus de la laringotraqueitis infecciosa (ILTV) que expresa las glicoproteínas virales B, D e I administrada por gota ocular
Roshan Paudel*1, Ana C. Zamora1, April L. Skipper1, David J. Hurley2, Lorraine H. Keller3, Maricarmen García1
1Universidad de Georgia, Departamento de Salud Poblacional, Atenas, Georgia, Estados Unidos; 2Universidad de Georgia, Departamento de Enfermedades Infecciosas, Atenas, Georgia, Estados Unidos; 3MBF Therapeutics Inc., Ambler, Pennsylvania, Estados Unidos
Se están explorando nuevas estrategias de vacunación para mejorar la protección contra el ILTV, garantizando al mismo tiempo la seguridad. Este estudio tuvo como objetivo evaluar la eficacia protectora de MBFT-308, una vacuna de ADN plasmídico que expresa las glicoproteínas gB, gD y gI del ILTV, administrada sobre nanopartículas de fosfato de calcio derivadas de polietilenimina y aplicada por gota ocular en una estrategia de prime/boost, ya sea sola o en aves vacunadas en ovo con una vacuna recombinante LT que expresa las glicoproteínas D e I. Brevemente, cuatro de seis grupos de pollos específicos libres de patógenos (SPF) (n=133) fueron vacunados mientras que dos permanecieron no vacunados (NVx). Un grupo recibió Innovax ND-ILT® (Merck Animal Health) a los 19 días de incubación (doe) (HVT-LT), un segundo grupo recibió plásmidos ILTV a los 3 y 17 días de edad (doa) (LTPL), el tercer grupo fue vacunado con HVT-LT a los 19 doe seguido de LT-PL por gota ocular a los 3 y 17 doa (HVT-LT + LTPL), y el cuarto grupo recibió LaryngoVac® de origen embrionario de pollo vivo (CEO) (Zoetis Animal Health) a los 9 doa. A los 35 doa, cuatro grupos vacunados y un grupo NVx fueron desafiados con una cepa virulenta de ILTV. El grupo vacunado con CEO mostró un 100% de supervivencia después del desafío, con puntajes de signos clínicos (CSS) significativamente más bajos (P<0,05) y carga génica de ILTV a los 3 y 5 días post-desafío (dpch) en comparación con el grupo NVx/Ch. Los grupos vacunados con LT-PL y HVT-LT+LT-PL presentaron tasas de supervivencia del 91% y 78%, respectivamente, frente al 80% y 65% de supervivencia para los grupos HVT-LT y NVx/Ch. No se observó una reducción significativa en los CSS y la carga génica de ILTV en los grupos LT-PL y HVT-LT+LTPL en comparación con el grupo NVx/Ch. Aunque no fue estadísticamente significativo, se observaron tendencias hacia la reducción de CSS y carga génica de ILTV para los grupos LT-PL y HVT-LT+LT-PL, respectivamente. Sin embargo, en comparación con el grupo HVT-LT, el grupo HVT-LT+LT-PL tuvo CSS y carga génica de ILTV numéricamente más altos. En conjunto, la formulación de plásmidos de ILTV administrada por gota ocular en una estrategia prime/boost evitó las mortalidades, sin embargo, no mitigó la replicación de ILTV ni redujo los signos clínicos. Además, la administración de plásmidos de ILTV por gota ocular en una estrategia prime/boost a pollos previamente vacunados con HVT-LT no mejoró la protección contra la enfermedad.
Castanea sativa tannin reduces coccidiosis intestinal
lesions in broilers Eveline Berwanger1, Fabrizio Oristanio*2,
18 ABSTRACTS OF PAPERS
Neyre N. Shiroma1, André N. Mayer1, Clarisse Techer2 1
SALUS
COM. DE PROD. DE SAÚDE E NUTRIÇÃO ANIMAL S.A.,
Technical, Santo Antônio de Posse, São Paulo,
Brazil; 2miXscience, Bruz, France
The aim of this study was to evaluate the effect of hidrolisable
tannin from Castanea sativa (Kingbrown®) as a coccidiostat on
broiler’s intestinal health. The trial was conducted at a
experimental facility in the state of São Paulo, Brazil. A total of
192 male Cobb chicks were assigned to four treatments, T1
negative control diet, T2 positive control diet, T3 salinomycin +
3nitro4hydroxyphenylarsonic acid diet, T4 Kingbrown® tannin
diet. Kingbrown® was added at 1kg per ton of feed. At 14 days of
age all treatments but the negative control were challenged
with Eimeria maxima (1ml with 12,000 sporulated oocysts/bird).
At 20 days of age jejunum fractions were sampled and scored for
lesion from zero to four. Lesion score means were compared by
Kruskal-Wallis test and lesion score frequencies were compared
by Kolmogorov-Smirnov test. Less than 7% of the birds not
challenged with E. maxima showed any intestinal lesion, whilst all
challenged birds showed intestinal lesions. Birds fed salinomycin
3nitro4hydroxyphenylarsonic acid diet reduced significantly the
lesion score when compared to the positive control group (2.1 to
1.67; p-value = 0.0075). Birds fed Kingbrown® tannin also
reduced significantly the lesion score (2.1 to 1.73; p-value =
0.0075) when compared to the positive control group. Both feed
aditives had the same effect over the lesion score (1.67 to 1.73; pvalue > 0.05). In conclusion, data from this study indicates that the
supplementation of Kingbrown® tannin to broilers reduces
intestinal lesions caused by Eimeria maxima.
Keywords: Eimeria maxima, tannin, coccidiostat, intestinal
lesions, chicks
M41 Environmental Monitoring of the IBV-G1-23 Variant
in Uruguayan Poultry Flocks Using the CAPTUS Air
Sampling Tool Martin Masner1, Luis-Miguel Gomez-Osorio1, Andres Pio1, Pia Fernandez1, Facundo Rocha Calvette1, Ignacio González23, Franco Bazzi4, William Serna1, Laura Maccio1 1metaBIX Biotech, Montevideo, Montevideo, Uruguay; 2Avicola El Campo, Tala, Uruguay; 3UDELAR, Veterinary Faculty, Montevideo, Uruguay; 4 3 Arroyos, Canelones, Uruguay Monitoring poultry environments for pathogens presents several challenges, including ensuring representative sampling, overcoming limitations of non-quantitative methods, and addressing the emergence of new pathogen variants that impact poultry production. This study investigates the use of CAPTUS, an air sampling device, to detect and quantify the IBV-G1-23 variant in Uruguayan poultry flocks across multiple production facilities. Sampling was conducted weekly or ad libitum on breeder and laying hens in countryside Uruguayan areas. Using the CAPTUS air sampler, 30-minute air samples were collected and subsequently analyzed in a molecular biology laboratory. Following nucleic acid extraction, targeted qPCR assays were performed for generic IBV and the specific IBV-G1-23 variant on individual or pooled samples. Additional pathogens, including other IBV variants, Metapneumovirus, Reovirus, Gumboro, Salmonella, and Mycoplasma G/S, were concurrently tested via qPCR on the collected samples. Most were also positive except Metapneumovirus. The IBV-G1-23 variant was detected in flocks with respiratory signs, particularly those lacking serotype-specific vaccination. A marked decrease in egg production (21-34%) was observed over 8-12 weeks during acute infection phases. Environmental detection of the virus persisted for at least ten weeks, with peak viral loads reaching hundreds to thousands of copies per cubic meter. Elevated serological levels for IBV confirmed field challenges by non-vaccine strains. In conclusion, CAPTUS air sampling provides a reliable method for pathogen surveillance, offering critical insights into environmental infection pressure and pathogen dynamics. The method’s adaptability allows for multi-pathogen detection, enabling rapid response strategies against the IBV-G1-23 variant, thus supporting poultry health and productivity. Keywords: Air Sampling, Bronchitis, IBV, CAPTUS, Environmental Pressure of Infection M42 Direct RNA sequencing with the Minion platform enables sequencing of nearly full-length viral RNA reads from Orthoavulavirus javaense Megan Mears2, Quentin Read3,
Abhijeet A. Bakre1 1USNPRC, Exotic and Emerging Avian Viral
Disease Research Unit, Athens, Georgia, United
States; 2
USNPRC, Exotic and Emerging Avian Viral Disease
Research Unit, Athens, Georgia, United States; 3USDA-ARS
Southeast Area, USDA, Raleigh, North Carolina, United States
Newcastle disease (ND) is caused by virulent strains
of Orthoavulavirus javaense (OAVJ). OAVJ can infect many
avian species but outbreaks with virulent strains can result in
significant economic losses for the poultry industry. Rapid
identification of virulent OAVJs in field samples is thus crucial to
ND outbreak containment. In this study, we hypothesized that
Direct RNA Sequencing using an Oxford Nanopore technologies
(ONT) MinION device and custom adapter would enable
sequencing of the full-length (~15.2kb) viral RNA genome of
OAVJ. RNA was extracted from biological triplicate samples of
sucrose purified virions of the LaSota strain of OAVJ, then
sequenced using the two different chemistries and associated
workflows available from ONT. Statistical differences between the
two groups was tested using an unpaired t-test with Welch’s
correction. The data demonstrate that a custom OAVJ-specific
adapter paired with the ONT DRS kits enables capture and
sequencing of OAVJ viral RNAs. Further, the new ONT SQKRNA004 chemistry and flow cells, paired with the associated super
accurate base calling workflow improves on read quality and
length compared to the previous SQK-RNA002 chemistry. This is
the first report of a method to sequence the near full-length viral
RNA genome of a member of the Paramyxoviridae family. While
additional improvements in DRS are needed before widespread
adaptation of this method for rapid field sequencing, DRS of
OAVJ has the potential to enable further studies into the viral
epitranscriptome and its role in infection and pathogenesis.
Keywords: Newcastle Disease virus, Direct RNA sequencing,
MinION, viral RNA, Paramyxovirus
Development of an assay to detect cytolysin and a
presumptive Enterococcus faecalis pathogenicity island
associated with chicken embryo mortality Jessica Foote1, Enid T. McKinley1 , Claire Podvin1, Zachary Zawada1, Jen Key1, Jodi Delago1 , Alexandra H. Smith1 1 Church & Dwight, Arm & Hammer Animal Nutrition, Waukesha, Wisconsin, United States The United States broiler hatchability rate has been steadily decreasing since 2012. One potential causative agent of this trend is Enterococcus faecalis, infection with which has been hypothesized to cause early embryo mortality in chickens. The purpose of this study was to determine the ability of E. faecalis to cause chicken embryo mortality, identify genes present in strains that caused significantly increased mortality, and to develop a high-throughput assay to detect these genes in field isolates. To achieve these goals, an embryo lethality assay was performed. Fertilized chicken embryos were injected with different strains of E. faecalis that had previously been isolated from poultry ABSTRACTS OF PAPERS 19 complexes and whose genomes had been sequenced. The mortality rate of each treatment group was recorded daily. After seven days, the cumulative mortality rates of each strain and control group were compared using Fisher’s exact test. Each strain had a significantly higher mortality rate than the control group (p<0.01), demonstrating that E. faecalis can cause embryo mortality. Strains containing the Enterococcus toxin cytolysin had significantly higher mortality than strains without (71% vs 21%, p<0.0001). A 20 kilobase pair pathogenicity island (PAI) containing multiple cell wall, capsule, and O-antigen genes was only found in strains that caused greater than 60% mortality. Strains containing this PAI had significantly higher mortality than strains without (78% vs 31%, p<0.0001). Primers were designed for three genes in the PAI and one gene in the cytolysin operon. These primers and an E. faecalis species-specific primer set were used to develop a multiplex PCR assay. This assay was successfully used to screen Enterococcus isolates from poultry complexes experiencing health issues. Cytolysin was detected in 2% of the E. faecalis isolates and the PAI was detected in 12%. In conclusion, an mPCR assay was developed to detect genetic markers in E. faecalis that are associated with increased chicken embryo mortality. This assay provides a valuable tool to monitor pathogenic E. faecalis in hatcheries to determine if highly virulent strains are associated with the current hatchability issues in the field. Keywords: Enterococcus, hatchability, embryo mortality, pathogen, genetics SCAD I M44 The efficacy of inactivated vaccine against H5 clade 2.3.4.4b highly pathogenic influenza virus in turkeys Jiho Lee1, Scott Lee1, Erica Spackman1, Chang-Won Lee1 1USDA,
SERPL, Athens, Georgia, United States
The unprecedented outbreak of clade 2.3.4.4b H5N1 highly
pathogenic avian influenza virus (HPAIV) in United States has
caused tremendous damage to the poultry industry. Because
turkeys have the highest number of affected individual flocks
among commercial poultry, evaluating vaccine efficacy and
characterizing antibody response of turkeys is crucial. An in-house
reverse-genetics generated H5N9 inactivated vaccine (SEP-22-
N9) was evaluated for its vaccine efficacy in turkeys against
current North American clade 2.3.4.4b H5 isolate,
A/turkey/Indiana/22-003707-003/2022 H5N1. Vaccination groups
were divided into 3 groups, which were vaccinated at different
time points (3, 7, or 9 weeks). All vaccinated groups showed 100%
survival rate and significantly reduced viral shedding after the
challenge when compared to the sham vaccinated group. The
enzyme linked lectin assay-neuraminidase inhibition (ELLA-NI)
was applied to assess the capability of detecting birds that have
been infected after the vaccination (DIVA-VI). Overall, the SEP22-N9 vaccine provided fast onset of immunity to protect turkeys
from mortality, reduced viral shedding, and was able to apply
ELLA-NI assay for DIVA-VI, demonstrating that the vaccine
could be used against currently circulating clade 2.3.4.4b H5
HPAIVs.
Keywords: Highly pathogenic avian influenza, Turkey,
Inactivated vaccine, Differentiating infected from vaccinated
animals (DIVA)
Immunomodulatory effects of essential oils on the in
vivo acute inflammatory responses initiated by intradermal
injection of Salmonella lipopolysaccharide in broiler chickens
under heat stress conditions Santiago Uribe-Diaz1, Jossie M. Santamaria1, Chrysta N. Beck1, Andressa S. Stein1, Raul Marcon1 , Alvaro Uribe-Serrano2, Jaime A. Angel-Isaza2, Guillermo TellezIsaias1, Billy Hargis1, Gisela F. Erf1 1University of Arkansas, Poultry Science, Fayetteville, Arkansas, United States; 2Promitec Santander SAS, Unidad de Innovacion Y Desarrollo Biotechnologico, Bucaramanga, Colombia Global warming is a growing challenge to the poultry industry as heat stress reduces productivity and weakens immune function. Essential oil (EO) supplementation has shown immunomodulatory activities in chickens. The objective of the study was to determine the effect of dietary supplementation of three EOs on the acute inflammatory responses to intradermal (i.d) injection of lipopolysaccharide (LPS) in chickens under heat stress (HS). Oneday-old COBB 500 broiler chicks were randomly assigned to one of five treatment groups (thermoneutral (TN), HS, HS-EO1, HSEO2, or HS-EO3) reared in environmental chambers. Cyclic HS was applied from 4d onwards. At 32d of age, 12 growing feathers (GFs) of 7 chickens/group were i.d.-injected with 1µg of LPS. GFs and heparinized blood were collected before (0h) and at 6 and 24h post-pulp injection (p.i.) to determine leukocyte profiles. GF-pulpand whole blood-cell suspensions were immunofluorescently stained to identify monocytes/macrophages, heterophils, B- and Tcells by flow cytometry. Data were analyzed by two-way repeated measures ANOVA to determine the effects of treatment, time, and their interactions. Tukey’s HSD multiple means comparisons were used as needed; significance was set at P<0.1. Heterophil levels in GFs and blood were elevated at 6h p.i., then returned to preinjection levels at 24h for all treatments. There was no effect of treatment on macrophage, and T- and B-cell levels in LPS-injected GF-pulps. In the blood, few treatment effects were observed postLPS injection; i.e., the concentrations of leukocytes (WBCs) were lower (P<0.1) in HS compared to TN broilers at 24h and those of heterophils were lower (P<0.1) in HS-EO1 compared to HS-EO2 at 6h. For all treatments, i.d. LPS injection decreased blood concentrations of T- and B-cells at 6h p.i. Interestingly, before LPS injections, the concentration of circulating WBC and T cells was higher in TN than in HS groups, a HS effect partially restored with EOs supplementation. In summary, essential oils supplementation may help mitigate some of the negative effects of heat stress on immune system development and function of chickens, particularly in maintaining white blood cell concentrations and ability to respond to bacterial inflammatory stimuli. Keywords: LPS, Immune response, Essential oils, Heat stress, Chicken M46 Protection efficacy of Infectious laryngotracheitis virus (ILTV) DNA plasmid vaccine formulation expressing viral glycoproteins B, D, and I delivered via eye drop Roshan Paudel1, Ana C. Zamora1, April L. Skipper1, David J. Hurley2,
Lorraine H. Keller3, Maricarmen García1 1University of Georgia,
Department of Population Health, Athens, Georgia, United
States; 2
University of Georgia, Department of Infectious Diseases,
Athens, Georgia, United States; 3MBF Therapeutics Inc., Ambler,
Pennsylvania, United States
Novel vaccination strategies to improve protection against ILTV
while ensuring safety are being explored. This study aimed to
assess the protective efficacy of MBFT-308, a DNA plasmid
vaccine expressing ILTV glycoproteins gB, gD, and gI, delivered
on polyethyleneimine-derivatized calcium phosphate
nanoparticles and administered via eye drop in a prime/boost
strategy by itself or to chickens vaccinated in ovo with a
recombinant LT vaccine expressing glycoproteins D and I. Briefly,
four of six groups of specific pathogen free (SPF) chickens
(n=133) were vaccinated while two remained non-vaccinated
(NVx). One group received the Innovax ND-ILT® (Merck Animal
Health) at 19 days of embryonation (doe) (HVT-LT), a second
group received ILTV plasmids at 3 and 17 days of age (doa) (LTPL), the third group was vaccinated with the HVT-LT at 19 doe
followed by LT-PL via eye drop at 3 and 17 doa (HVT-LT + LTPL), and the fourth group received the live chicken embryo origin
(CEO) LaryngoVac® (Zoetis Animal Health) at 9 doa. At 35 doa,
four vaccinated groups and one NVx group were challenged with
an ILTV virulent strain. The CEO vaccinated group showed 100%
survival after the challenge with significantly lower (P<0.05)
clinical signs scores (CSS) and ILTV genome load at 3 and 5 days
post-challenge (dpch) than the NVx/Ch group. The LT-PL and
HVT-LT+LT-PL vaccinated groups exhibited survival rates of
91% and 78%, respectively, vs. 80% and 65% survivability for
HVT-LT and NVx/Ch groups. No significant reduction in CSS and
ILTV genome load were observed for LT-PL and HVT-LT+LTPL groups compared to NVx/Ch group. Although not statistically
significant, trends toward reduction in CSS and ILTV genome load
for the LT-PL and HVT-LT+LT-PL groups, respectively, were
observed. However, compared to the HVT-LT group, the HVTLT+LT-PL group had numerically higher CSS and ILTV genome
load. Taken together, ILTV plasmids formulation administered via
eye drop in a prime/boost strategy avoided mortalities, however it
did not mitigate the ILTV replication or reduce clinical signs.
Additionally, administration of eye drop prime/boost ILTV
plasmids to previously HVT-LT chickens did not improve
protection against disease.